GBZ-T 300.160—2017
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ICS100C52中华人民共和国国家职业卫生标准GBZ/T代替GBZ/T8120XX工作场所空气有毒物质测定第160部分：洗衣粉酶DeterminationoftoxicsubstancesinworkplaceairPartEnzymesinwashingpowder20XX-11-09发布20XX-05-01实施GBZ/TI前言本部分为GBZ/T300的第160部分。
本部分按照GB/T120XX给出的规则起草。
1、本部分代替GBZ/T8120XX工作场所空气有毒物质测定生物类化合物。
2、本部分与GBZ/T8120XX相比，主要修改如下：修改了标准名称；增加了待测物的基本信息；改进了空气采样和标准系列浓度的表达；补充了样品空白要求和方法性能指标。
3、本部分中的主要起草单位和主要起草人：洗衣粉酶的溶剂洗脱-抗体结合-比色法主要起草单位：复旦大学医学院公共卫生学院。
主要起草人：梁友信。
本部分所代替标准的历次版本发布情况为：GBZ/T8120XX。
4、GBZ/T工作场所空气有毒物质测定第160部分：洗衣粉酶1范围GBZ/T300的本部分规定了工作场所空气中洗衣粉酶的溶剂洗脱-抗体结合-比色法。
本部分适用于工作场所空气中气溶胶态洗衣粉酶浓度的检测。
2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。
凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。
5、凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
6、GBZ159工作场所空气中有害物质监测的采样规范GBZ/T4职业卫生标准制定指南第4部分：工作场所空气中化学物质的测定方法3洗衣粉酶的溶剂洗脱-抗体结合-比色法1原理空气中气溶胶态含酶洗衣粉用超细玻璃纤维滤纸采集，洗脱后，与包被在酶标板上的特异性抗体（Ab结合，然后加入特异性抗体（Ab，最后与一连有标记物的抗体（Ab结合，再与显色剂反应生成有色化合物，用酶标仪测量吸光度，测定酶的浓度。
2仪器1超细玻璃纤维滤纸。
2大采样夹，滤料直径为37mm或40mm。
3小采样夹，滤料直径为25mm。
7、4空气采样器，流量0L/min2L/min和0L/min10L/min。
5烧杯，50mL。
6酶标板和酶标板盖。
7多孔道微量加样器。
8可调微量加样器。
9恒温箱。
10离心管，25mL。
11具塞试管，10mL。
12酶标仪。
3试剂1实验用水为去离子水，试剂为分析纯，于4冰箱保存。
8、GBZ/T.2抗体包被缓冲液，pH2：151g碳酸钠和293g碳酸氢钠溶于100mL水中，可保存2个月。
3洗板液：22g氯化钠、186gTris和1g牛血清白蛋白(BSA)溶于100mL水中，用6mol/L盐酸溶液调pH至0，加入05mL吐温20，混匀，可保存7d。
4枸橼酸-磷酸缓冲液，pH2：730g枸橼酸和387g磷酸氢二钠(Na2HPO412H2O)溶于100mL水中，可保存1个月。
5BSA封闭液：0gBSA溶于100mL洗板液中。
6洗脱液：922g氯化钠、093gTris、496g硫代硫酸钠(Na2S2O35H2O)和0147g氯化钙(CaCl22H2O)溶于约80mL水中，加入1gBSA，溶解后，用6mol/L盐酸溶液调pH至0，转移到100mL容量瓶中，定容后加入10mL吐温20，混匀，可保存7d。
7邻苯二胺（OPD）溶液，pH0：0mgOPD置于50mL棕色瓶中，加入15mL枸橼酸-磷酸缓冲液，溶解后，加入5L过氧化氢(，混匀。
临用前配制。
若溶液变黄，应重新配制。
8兔抗体包被溶液：用10mL抗体包被缓冲液稀释10L兔抗血清，混匀。
9豚鼠抗体：用10mL洗板液稀释10L豚鼠抗体，混匀。
10标有过氧化物酶的兔抗豚鼠抗体：用10mL洗板液稀释10L标有过氧化物酶的兔抗豚鼠抗体，混匀。
11硫酸溶液，1mol/L。
12标准酶，用国家认可的洗衣粉酶。
4样品的采集、运输和保存1现场采样按照GBZ159执行。
2短时间采样：在采样点，用装好超细玻璃纤维滤纸的大采样夹，以0L/min流量采集15min空气样品。
3长时间采样：在采样点，用装好超细玻璃纤维滤纸的小采样夹，以0L/min流量采集2h8h空气样品。
4采样后，打开采样夹，取出滤纸，接尘面朝里对折两次，放入清洁的塑料袋或纸袋中，置清洁容器内运输和保存。
样品宜尽快测定。
5样品空白：在采样点，打开装好超细玻璃纤维滤纸的采样夹，立即取出滤纸，放入清洁的塑料袋或纸袋中，然后同样品一起运输、保存和测定。
每批次样品不少于2个样品空白。
5分析步骤1样品处理：将超细玻璃纤维滤纸放入烧杯内，加0mL洗脱液，洗脱20min，不时振摇。
样品溶液用滤纸过滤或离心后供测定。
2标准曲线的制备：在8支容量瓶中，用标准酶配制成0ng/mL0ng/mL标准系列。
于酶标板的每个孔中加100L兔抗体包被溶液，置4冰箱内放置过夜。
加样时，加样头不可接触酶标板底部，不容许冰冻。
第二天，从冰箱内取出酶标板，翻转，弃去兔抗体包被溶液，在数层纸上拍打，甩尽孔中的兔抗体包被溶液。
每个孔用洗板液洗涤3次，每次约250L。
然后加200LBSA封闭液，加样头不能接触酶标板。
盖上酶标板盖，放置1h以上。
甩尽孔中液体。
若不立即使用，可用酶标板膜封好，可储存2个月。
向每个孔中加入50L标准酶溶液，全部加平行样。
加入50L豚鼠抗体。
将酶标板放入37恒温箱内，反应90min。
取出，每个孔用洗板液洗涤3次，每次约250L。
各加入100L标有过氧化物酶的兔抗豚鼠抗体，再置37恒温箱内，反应90min。
取出，每个孔用洗板液洗涤3次，每次约250L。
用枸橼酸-磷酸缓冲液冲洗3次。
以保持同一时间间隔，向每个孔加入100LOPD溶液；放入37恒温箱内，反应至有合适的黄色生成；向每个孔以保持同一时间间隔，加入150L硫酸溶液，以终止显色反GBZ/T应。
擦净酶标板底部，用酶标仪测定每个孔的吸光度（双波长法的波长为492nm和620nm）。
以测得的吸光度值对相应的酶浓度（ng/mL）绘制标准曲线或计算回归方程。
3样品测定：用测定。
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